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室山 幸太郎小原 達矢廣▲瀬▼ 義隆山本 憲朗室▲崎▼ 伸二山本 佳弘 JP 5121715 特許公報(B2) 20121102 2008528702 20060810 保湿剤 ハウスウェルネスフーズ株式会社 306019030 岩谷 龍 100077012 室山 幸太郎 小原 達矢 廣▲瀬▼ 義隆 山本 憲朗 室▲崎▼ 伸二 山本 佳弘 20130116 A61K 35/74 20060101AFI20121220BHJP A61P 17/16 20060101ALI20121220BHJP JPA61K35/74 AA61P17/16 A61K 35/00 A61P 17/00 特開平０４−２６４０３４（ＪＰ，Ａ） 特開平０４−３５６４０９（ＪＰ，Ａ） 特開平０５−０１７３６３（ＪＰ，Ａ） 国際公開第２００４／０７８１８８（ＷＯ，Ａ１） 特開２００２−１４５７３７（ＪＰ，Ａ） 特開２００１−１３９４１２（ＪＰ，Ａ） 国際公開第２００４／０８４９２２（ＷＯ，Ａ１） 国際公開第２００４／０８４９２３（ＷＯ，Ａ１） 3 FERM BP-08607 JP2006315868 20060810 WO2008018143 20080214 8 20090306 福井 悟 本発明は、保湿剤に関し、さらに詳しくはラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体を含有することを特徴とする保湿剤に関する。 ヒトの皮膚は、薄い生物学的防御膜である角質層によって覆われており、乾燥した大気中でも水分を失うことなく生活することができるのは、外界と接するこの角質層が存在しているからである。角質層は薄くしなやかで且つ体内の水分を失わないように保ち、健常な皮膚状態を維持するように調節している。一般に皮膚の水分量が１０〜２０％に保たれた状態が、健康な皮膚であるといわれている。 しかしながら、老化や季節変動などにより正常な角質水分調節機構が損なわれると肌荒れなどを生じ、深刻なスキントラブルを招く恐れもある。従来から、角質層の水分保持能力を改善し、肌荒れを防止するためにグリセリンなどの多価アルコール、ヒアルロン酸、コンドロイチン、コラーゲン、ムコ多糖類などを配合した外用保湿剤が知られている（特許文献１〜３参照）。また、β−グルカンとエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）の加熱処理菌体とを併用して配合した外用保湿剤が知られている（特許文献４参照）。さらに、セラミドと乳酸菌の生菌体とを併用した美容食品が知られている（特許文献５参照）。特開２００１−８９３８１号公報特開２００２−１４５７５３号公報特開２００５−３１４４０２号公報特開２００４−２６９４０８号公報特開２００４−２５４６３２号公報このような事情に鑑み、本発明は優れた保湿効果を有する保湿剤を提供することを目的とする。特に本発明は、経口投与（内服）により保湿効果を発揮する保湿剤を提供することを目的とする。 本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体を経口投与することにより優れた保湿効果を有することを見出し、この知見に基づいてさらに研究を進め、本発明を完成するに至った。 すなわち、本発明は、［１］ ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体を有効成分とすることを特徴とする保湿剤、［２］ ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）がラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｌ−１３７、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７）である上記［１］記載の保湿剤、［３］ 経口投与用である上記［１］または［２］のいずれかに記載の保湿剤、［４］ ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体の有効量を皮膚の保湿を必要とするヒトに投与することを特徴とする皮膚の保湿方法、および［５］ 保湿剤を製造するためのラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体の使用に関する。 本発明の保湿剤は、これを経口投与することにより、あるいは皮膚に直接適用することにより、優れた保湿効果を示し、シワ、タルミ、肌のハリ、シミ、クスミといった種々の皮膚症状の防止や改善に優れた効果を発揮する。図１は、試験例１におけるラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７の加熱死菌体投与群（図中、Ｌ１３７投与群と表示）と対照群との角質水分量（％）の経時変化を示す図である。 本発明に係る保湿剤の有効成分は、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体であり、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を加熱処理して得られる死菌体である。ラクトバチルス・プランタラムに属する菌の代表的なものとして、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７、ラクトバチルス・プランタラムＪＣＭ １１４９基準株、ラクトバチルス・プランタラムＬ−０５１（微工研菌寄第１１９１２号）などを挙げることができるが、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７が最も好ましい。上記のラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７は独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７号（平成７年１１月３０日に寄託されたＦＥＲＭ Ｐ−１５３１７号より移管）として寄託されている。 上記の本発明に用いる菌は天然培地、合成培地、半合成培地などの培地に培養することにより得ることができる。培地としては、窒素源および炭素源を含有するものが用いられる。窒素源としては、例えば、肉エキス、ペプトン、グルテン、カゼイン、酵母エキス、アミノ酸などが用いられ、炭素源としては、例えば、グルコース、キシロース、フラクトース、イノシトール、マルトース、水アメ、麹汁、澱粉、バカス、フスマ、糖蜜、グリセリンなどが用いられる。このほか、無機質として、例えば硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、塩化マグネシウム、食塩、鉄、マンガン、モリブデンなどを添加することができ、更に各種ビタミン類その他を添加することができる。培養温度は約２５〜４０℃、好ましくは約２７〜３５℃であり、培養時間は約１２〜４８時間程度であり、通気振盪してもよい。培地のｐＨは約３〜６、好ましくは約４〜６である。 培養終了後、菌体を採取した後、加熱死菌体を調製してもよいし、または菌体を培養液から一旦分離することなく、培養液中の菌体を加熱死菌体にし、その加熱死菌体を採取してもよい。菌体を採取する方法としては、例えば培養液に蒸留水を加え、遠心分離などの手段により上清を除き、必要によりその操作を繰り返し、遠心分離や濾過などにより菌体を採取する方法がある。 本発明のラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体は、採取された生菌あるいは生菌を含んだ培養液ごと、加熱処理により不活性化させ、噴霧乾燥、凍結乾燥などの適当な手段によって乾燥することにより得られる。加熱温度は通常約６０〜１００℃、好ましくは約７０〜９０℃である。加熱手段としては、ヒーターを用いる公知の手段であってよい。加熱時間は所望の温度に達した後、通常約５〜４０分、好ましくは約１０〜３０分である。 本発明の保湿剤は、経口で投与する場合、有効成分である加熱死菌体の投与量は、対象者の性別、年齢、体重、状態（症状）によっても異なるが、成人一人（体重約６０ｋｇ）に対し、１日あたり、約０．４ｍｇ〜２ｇ、好ましくは約１ｍｇ〜１ｇ、さらに好ましくは約５ｍｇ〜０．５ｇの範囲である。皮膚に直接適用する場合は、適用する皮膚面積に応じて、適宜選択することができるが、有効成分である加熱死菌体の投与量は、通常、適用部位の面積約１０ｃｍ２に対して、１日につき、約０．０１〜２．５ｍｇ、好ましくは約０．０２〜１ｍｇであるのがよい。前記の投与用量を、１日あたり、１回または数回に分けて投与ないし適用すると良い。 本発明の保湿剤を経口投与する場合は、散剤、顆粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤などの固型製剤であってもよく、シロップ剤などの液剤であってもよい。これらの製剤を製造する場合には、その製剤形態に応じた担体もしくは添加剤を使用することができる。担体もしくは添加剤としては、例えば、賦形剤（ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、乳糖、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロース、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、ケイ酸、リン酸カリウムなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、精製タルク、ポリエチレングリコールなど）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム液、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）、溶解補助剤（アラビアゴム、ポリソルベート８０など）、吸収促進剤（ラウリル硫酸ナトリウムなど）、緩衝剤（リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液など）、保存剤（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウムなど）、増粘剤（プロピレングリコール、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなど）、安定化剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）またはｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）を挙げることができる。 また、本発明の保湿剤は化粧品に配合して使用することもできる。化粧品としては、例えば、ボディ洗浄料、ハンド洗浄料、洗顔料などの洗浄料類や化粧水、乳液、クリームなどの基礎化粧料、ファンデーション、アンダーメークアップ、白粉などのメークアップ料などの化粧料剤形などが挙げられる。本発明の保湿剤の化粧品への配合量は、特に制限されないが、通常、有効成分であるラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）の加熱死菌体の量として、化粧品全量中の０．０１〜２．５重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０２〜１重量％である。 以下に試験例および実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。［試験例１］ グルコース１％、酵母エキス１％、ポリペプトン０．５％、肉エキス０．２％、酢酸ナトリウム０．２％、硫酸マンガン・４水和物０．００１％、硫酸鉄・７水和物０．００１％、食塩０．００１％、ショ糖脂肪酸エステル０．０５％含む培地６Ｌにラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７）株を接種し、３２℃で２４時間培養した。培養後、培養液を５０００ｒｐｍで３５分間遠心分離し菌体を集めた。得られた菌体を生理食塩水によく分散し、５０００ｒｐｍで３５分間遠心分離した後、上清を除き菌体を集めた。この操作を３回繰り返した後、菌体をイオン交換水に分散し、７０℃１０分間加熱した後、凍結乾燥することにより、加熱死菌体を約７ｇ得た。前記加熱死菌体を粉末飼料（ＣＥ−２、日本クレア（株）製）に最終重量１０ｍｇ％になるように加え、混合した。 ７週齢のへアレスマウス（ＨＲ−１、雌、日本エスエルシー（株））に試験開始前の１週間は予備飼育としてＣＥ−２粉末飼料と水を自由摂取させた。体重により群分けし（各群８匹）、上記で調製したラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７加熱死菌体配合飼料を与え６週間飼育した。同時に、対照群には、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７加熱死菌体を含まないＣＥ−２粉末飼料を与え飼育した。 群分け時から２週間毎に肌水分計（モイスチャーチェッカー ＭＹ−８０８Ｓ、スカラ（株）製）で背中側の中心から下半身（腰部から臀部）付近の肌の左右を交互に各５回（計１０回）測定した。最小値から２データおよび最大値から２データを除外し、６データの平均値を各個体の角質水分量（％）とした。各個体の角質水分量から各群の平均値±標準偏差を求め、その経時変化を図１に示す。 図１から明らかなように、４週目まではラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７加熱死菌体投与群は対照群と比べて差はなかったが、６週目にラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７加熱死菌体投与群は対照群に比べて有意に角質層の水分保持能力が改善された。［実施例１］ 下記表１に記載の配合量にて各原料をよく混合した後、本発明の保湿剤の重量が１錠あたりの重量が１０ｍｇとなるように打錠して、１錠５００ｍｇの錠剤を製造した。［実施例２］下記表２に記載の配合量にて、常法により、クリーム剤を製造した。本発明により、角質層の水分保持能力を改善し、肌荒れの防止・回復などに有効な保湿剤を提供することができる。 ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｌ−１３７、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７）の加熱死菌体を有効成分とし、経口投与用であることを特徴とする保湿剤。 ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｌ−１３７、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７）の加熱死菌体の有効量を皮膚の保湿を必要とするヒトに経口投与することを特徴とする非治療的な皮膚の保湿方法。 経口投与用の保湿剤を製造するためのラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｌ−１３７、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８６０７）の加熱死菌体の使用。